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產(chǎn)品規(guī)格：20 μL×20T, 20 μL×100T

產(chǎn)品內(nèi)容

* MasterMix 包含以下組分：逆轉(zhuǎn)錄酶，RNA 酶抑制劑，dNTPs, buffer, Oligo(dT)20和隨機(jī)引物。
儲存條件：儲存于-20℃，有效期見外包裝。

產(chǎn)品介紹 

     UEIris II RT-PCR System for First-Strand cDNA Synthesis 是將RNA合成cDNA的一個(gè)操作更為簡便的系統(tǒng)， 含有第一鏈 cDNA 合成所需的全部試劑，僅需加入 RNA 模板，dsDNase 和水即可進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。合成的第一鏈 cDNA 可廣泛應(yīng)用于第二鏈合成、雜交、PCR 擴(kuò)增、 Real Time PCR 反應(yīng)等。

UEIris II 預(yù)混液中的逆轉(zhuǎn)錄酶是全新開發(fā)的新一代逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶具有更快的反應(yīng)速度，只需 10 min 即可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。該逆轉(zhuǎn)錄酶還具有產(chǎn)物得率更高、獲得的 cDNA 片段更長、模板使用范圍更廣等特點(diǎn)。

    試劑盒中的 dsDNase 特異性消化雙鏈 DNA，而不消化單鏈 DNA 和 RNA，并且具有熱敏感性，可在 55℃快速地不可逆失活，實(shí)現(xiàn)去除基因組污染與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)同步完成。

使用方法

1. 在冰浴的無核酸酶的離心管中配制下列逆轉(zhuǎn)錄體系：

2. 輕輕混勻，瞬時(shí)離心（使液體沉于底部）； 

3. 在 PCR 儀上進(jìn)行下列條件的反應(yīng)： 37℃溫育 2 分鐘，去除基因組污染 55℃，孵育 10 min（若目標(biāo) RNA 小于 3 kb，可適當(dāng)縮短反應(yīng)時(shí)間至 5 min） 85℃，10 sec 

4. 將獲得的產(chǎn)物迅速置于冰上或立即保存于-20℃，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng) 

    1. RNA 模板的純度和完整性是影響逆轉(zhuǎn)錄效果的重要因素， 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等雜質(zhì)或 RNA 降解。 

    2. 若后續(xù)實(shí)驗(yàn)為 qPCR，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過PCR 體系終體積的 1/10，如 20 μL 的 PCR 反應(yīng)體系，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過 2 μL。 

    3. 預(yù)混液中已經(jīng)包含 Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物，不僅適用于包 Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA，也適用于不含 Poly(A)結(jié)構(gòu)的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等 模板，但不適用于 miRNA 等小 RNA 模板。