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1 簡介

      金屬螯合親和層析介質(zhì)，又稱固定金屬離子親和色譜，其原理是利用蛋白質(zhì)表面的一些氨基酸，如組 氨酸能與多種過渡金屬離子如Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，F(xiàn)e3+發(fā)生特殊的相互作用，能夠吸附富含這類氨基 酸的蛋白質(zhì)，從而達(dá)到分離純化的目的。因此，偶聯(lián)這些金屬離子的瓊脂糖凝膠就能夠選擇性地分離出這 些含有多個(gè)組氨酸的蛋白以及對金屬離子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。一般來說，Ni2+是用于純化 組氨酸標(biāo)記的蛋白質(zhì)的優(yōu)選金屬離子。半胱氨酸和色氨酸也能與固定金屬離子結(jié)合，但這種結(jié)合力要遠(yuǎn)小 于組氨酸殘基與金屬離子的結(jié)合力。 鎳親和層析介質(zhì)具有特異性好、流速快的優(yōu)點(diǎn)，非常適合放大生產(chǎn)。

2 性能參數(shù)：

*檢測條件： 層析柱 16mm×200mm *柱床高 5cm，25℃

3 使用方法 

      Ni-NTA瓊脂糖凝膠6FF預(yù)先偶聯(lián)Ni2+離子。通常，Ni2+是用于純化重組組氨酸標(biāo)簽蛋白的優(yōu)選金屬離子， 用咪唑進(jìn)行洗脫。 

      我們建議在含0.5-1.0 M NaCl的緩沖液，中性至弱堿性pH 7-8，這樣的條件下結(jié)合，經(jīng)常使用磷酸鈉緩沖液。也可以使用Tris-HCl，但是在金屬-蛋白質(zhì)親和力非常弱的情況下應(yīng)該避免，因?yàn)樗梢越档徒Y(jié)合強(qiáng)度，在緩沖液中避免螯合劑如EDTA或檸檬酸鹽的存在。

       如果重組組氨酸標(biāo)簽蛋白表達(dá)為包涵體，則在所有緩沖液中包括高達(dá)6M Gua-HCl或8M尿素。當(dāng)使用 高濃度的尿素或Gua-HCl時(shí)，通常發(fā)生蛋白質(zhì)解折疊。包涵體變性復(fù)性是個(gè)很復(fù)雜的過程，一般的建議純 化可溶蛋白。 

提示：含有尿素的樣品可以通過SDS-PAGE直接分析，而含有Gua-HCl的樣品在SDS-PAGE之前必須用 尿素緩沖液置換緩沖液。

4 保存

使用完的填料，用純水徹底沖洗，最后保存在 20%乙醇中，4℃保存。 

注意事項(xiàng)： 

1.上樣之前，樣品必須經(jīng)過膜過濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。 

2.在使用過程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于 0.1 摩爾。堿會(huì)使流速變慢。 

3.不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。