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應(yīng)用范圍：熒光標記染料

產(chǎn)品參數(shù) 

Ex/Em: 548/565 nm 

分子量：～766

貯存條件：-20℃避光保存, 可以儲存 6 個月，可以采用 pH7.4 的 10mM Tris 溶解后，分裝保存，避免反復(fù)凍融。

使用方法 

DNA 標記

1、試劑（自備） 

（1） Taq DNA 聚合酶 

（2）10× Taq reaction buffer 

（3）25 mM MgCl2 

（4）dATP, dTTP, dCTP, dGTP (單獨溶液), 1 mM each 

（5）DNA 模板 

（6）正向、反向引物，10 μM each 

（7）PCR 清潔試劑盒

2、PCR 反應(yīng) 

2.1 按照表 1 反應(yīng)體系配制 PCR 反應(yīng)混合液： 

2.2 每個反應(yīng)管加 1μL 1mM Sulfo-Cy3-E-dUTP 注：陰性對照管，加 1 μL 1mM dTTP 代替 Sulfo-Cy3-E-dUTP 

2.3 按照表 2 程序運行 PCR 反應(yīng) 

注：

1）熱變性時間依據(jù)不同的 Taq 酶進行調(diào)整 

2）退火溫度設(shè)置：Tm - 5℃ 

3）延伸時間根據(jù)擴增片段大小而定，一般 200-300 bp 片段設(shè)為 1 min 即可

2.4 可選步驟用 PCR 清潔試劑盒去除未摻入的單核苷酸

                              表 1 PCR 反應(yīng)體系

                                 表 2 PCR 反應(yīng)條件

2.5 取 10%的 PCR 產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳（凝膠不加入DNA 染料），檢測 PCR 反應(yīng)的效率和特異性，通過紫外凝膠成像儀或激光凝膠掃描儀觀察。 

注：凝膠染色前先觀察染料的熒光，以免與下一步的凝膠染料發(fā)生熒光淬滅。

2.6 采用后染法，使用 DNA 凝膠染料對凝膠進行染色，觀察總的 PCR 產(chǎn)物或陰性對照組的 PCR 擴增產(chǎn)物。